产品目录

本试剂盒适用于从各种原代或传代细胞中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

• 使用方便，从细胞中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• Western实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubulin。
  
• 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。

• 提取液制备：每500μL冷的细胞蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
  
• 取5～10×10⁶个细胞，在4℃，1000rpm条件离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
  注：细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  
• 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
• 每5×10⁶个细胞中加入500μL冷的总蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15～20分钟。
  
• 在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
  
• 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。